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小鼠骨髓间充质干细胞培养方法

标签:骨髓间充质干细胞

小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)的分离。从股骨和胫骨中提取的所有成核细胞(ANC)的单悬架在37°C和5%的CO2下以15×106的密度种子成100毫米培养皿。两天后,非粘附细胞被移除,附着细胞在α很低必 需培养基中保持16天,并补充20%的胎儿牛血清,2mM L-谷氨酰胺,55μM 2-mercaptoethanol,100 U/ml青霉素和100微克/ml链霉素(体外来基)。形成结肠的附着细胞被传递一次,供进一步实验使用。


骨髓间充质干细胞


小鼠骨髓间充质干细胞外基质涂层皿的制备。简而言之,100%的BMMSCs与100nM L-抗坏血酸磷酸盐的培养基。两周后,培养物被PBS清洗,并在室温下用0.005%的海卫一X-100(西格玛)孵化15分钟,以去除细胞。在37°C下,ECM用DN酶I(100单位/毫升;西格玛)治疗1小时。ECM与PBS一起洗了三次,并在4°C下储存在2毫升PBS中,其中含有100 U/ml青霉素、100微克/毫升链霉素和0.25微克/毫升真菌素(体外来)。


在培养悬浮液中分离小鼠骨髓间充质干细胞(S-BMMSC)。骨髓衍生的非国大(15×106)被播种成100毫米的培养皿,并培养两天。收集并离心带浮细胞的培养上层,以获得假定的非附着BMMSC。这些细胞在ECM涂层的盘子上以指示编号重新播种。2天后,培养物中的漂浮细胞被PBS去除,细胞外基质上的附着细胞又维持了14天。形成菌落的附着细胞通过一次,并在常规的塑料培养皿上进行亚培养,以进行进一步实验。对于一些干细胞表征分析,我们使用MACS磁分离系统收集了SSEA4阳性S-BMMSC,并在培养中扩展。


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2019-01-13

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