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干细胞研究的基本方法

标签:干细胞研究

干细胞研究的分化是不可逆的,没有一个系统能够检测到一个单元从一个分化程度更高的部门返回到一个先前分化程度较低的部门的情况,造血系统由增殖细胞和丧失这种能力的细胞组成,包含确保整个系统维持的元素,这些元素长期以来被称为干细胞。 


干细胞研究


根据定义,后者需要至少具有两个主要特性,与整个生物体的寿命相当的自我维持能力,以及分化成更成熟的细胞成分的能力,长期以来,研究造血干细胞的问题一直是推测性的,只有建立了一种克隆受辐照小鼠脾脏造血细胞的方法后,其实验研究才有可能实现。 


注入致死剂量照射的小鼠中的少量骨髓细胞被转运至各种造血器官,尤其是脾脏,引入的造血细胞的增殖导致造血灶的形成(集落),散布在整个脾脏中,并以结节的形式从肉眼清晰可见,在移植后的7至10天内很多可容纳数百万个造血细胞。


平均而言,在104种同系骨髓细胞的移植过程中会形成1至3个菌落,这就提出了任何克隆方法的关键问题,一个集落是由一个造血细胞形成还是作为移植种群一部分的细胞群参与其克隆,结果表明(Till,McCulloch,1961),随着移植细胞数量的增加,菌落数量呈线性增加,这一事实是支持克隆的克隆起源的有力论据。 


然而,仅在注射的细胞数量与新兴菌落数量之间存在线性关系的事实不足以证明菌落的克隆起源,实际上,如果两种或多种细胞类型共同参与菌落的形成,其中只有一种限制在造血细胞的悬浮液中,那么在这种情况下,将观察到引入的细胞数与产生的菌落数之间的线性关系,使用放射标记物的方法证明了脾脏中菌落的克隆特征(Becker E. and,1963)。


为此目的,用250 rad的剂量辐照小鼠,并用大剂量的同系骨髓移植,然后用650rad的剂量再次辐照,在这些条件下,受体小鼠接受的总剂量为900拉德,这几乎使它们自己的集落形成细胞完全失活,而移植的细胞则接受了较低剂量的辐射(650拉德),其中一些存活了下来, 与此同时,有很高的概率,一个细胞照射在这样的剂量,尽管它生存,耐某种稳定染色体畸变(染色体标记物),这使得它能够确定它和它的后代。


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2020-12-23

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